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总蛋白检测试剂盒(双缩脲比吸光度比色法)多用于血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定，无需与标准品进行比对，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲比吸光度比色法是按照Doumas方法所规定的双缩脲试剂、控制反应条件和校准分光光度计的情况下，根据蛋白质双缩脲复合物的比吸光度，无需检测标准品吸光度，直接计算出总蛋白质浓度，该试剂盒120T可检测约60个样本。

• 上述计算公式是以所用分光光度计波长准确，带宽≤2nm、比色杯光径准确1cm时，总蛋白含量根据比吸光度直接计算。
  
• 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。
  
• 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品4、检测比色杯准确光径很重要，可用钴盐或重铬酸钾进行检测，其吸光度分别为0.556和0.535，如检测的吸光度与实际不符，应进行校正，校正系数F=A_s/A_m。其计算公式为:总蛋白(g/L)=(A_c/0.298)×51×F
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 样本处理：血清、血浆样本直接取50μL检测，对于组织样本，按组织质量(g)∶生理盐水(ml)=1∶9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，2500g离心10min，取50μL上清待检。
  
• TP加样：按照下表设置系列管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
  

  加入物(ml)	蒸馏水 调零管	双缩脲 调零管	试剂 空白管	样本 空白管	测定管
  ddH2O	2.04	—	0.04	—	—
  待检样品(血清、血浆、组织匀浆液)	—	—	—	0.04	0.04
  双缩脲空白试剂	—	2.04	—	2	—
  Doumas双缩脲试剂	—	—	2	—	2

  
  
• TP测定：混匀，25℃孵育30min，用经过校准的精密分光光度计，比色杯光径1cm，测定540nm波长处的吸光度；读取测定管和试剂空白管的吸光度时，以蒸馏水调零管调零；读取样本空白管的吸光度时，以双缩脲调零管调零。